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技術文章

液相色譜柱的結(jié)構(gòu)及使用

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色譜柱是運用于色譜儀系統(tǒng)中起著分離作用的儀器,是色譜儀分析系統(tǒng)的核心部件,色譜柱柱效的高低影響著檢測速率的快慢以及檢測結(jié)果的準確性。對色譜柱的要求是柱效高、選擇性好,分析速度快。色譜柱的性質(zhì)(粒度、粒徑分布等)、填充料、柱長、固定相和流動相的種類等都是影響色譜柱柱效的因素。因此,為了提高色譜柱的柱效,保證液相色譜儀分析檢測的靈敏性,了解液相色譜柱的結(jié)構(gòu)性能尤為重要。   

     
    色譜柱空柱是由柱接頭、柱管及濾片組裝而成。柱接頭是兩端螺紋組件,采用低死體積結(jié)構(gòu),一端是7/16英寸外螺紋,另一端是3/16英寸的內(nèi)螺紋 (國內(nèi)外已規(guī)范化)。7/16英寸外螺紋與1/4英寸柱管(Φ6.35mm)連接,中間放置壓環(huán)用于密封。3/16英寸的內(nèi)螺紋與1/16英寸 (Φ1.57mm)的連接管連接,中間也放置壓環(huán)用于柱接頭的密封。為了盡量減少柱外死體積,提高色譜柱柱效。在安裝色譜柱時,用Φ1.57mm連接管通 過空心螺釘壓環(huán)后要盡量插到底,然后再擰緊空心螺釘。壓環(huán)被空心螺釘擠壓變形后緊箍在連接管上(連接管通過壓環(huán)后露出的管長度應嚴格控制在2.5mm長或 其他固定尺寸)。
    在兩端柱接頭內(nèi),柱管兩端各放置一片不銹鋼濾片(或濾網(wǎng)),用于封堵柱填料不被流動相沖出柱外而流失??罩鹘M件均為316#不銹鋼材質(zhì),能耐受 一般的溶劑作用。但由于含氯化物的溶劑對其有一定的腐蝕性,故使用時要注意,柱及連接管內(nèi)不能長時間存留此類溶劑,以避免腐蝕。


    液相色譜柱的分離作用是在填料與流動相之間進行的,液相色譜柱的分類是依據(jù)填料類型而定。


    正相柱:多以硅膠為柱填料。根據(jù)外型可分為無定型和球型兩種,其顆粒直徑在3—10 μm的范圍內(nèi)。另一類正相填料是硅膠表面鍵合—CN,-NH2等官能團即所謂的鍵合相硅膠。
    反相柱:主要是以硅膠為基質(zhì),在其表面鍵合十八烷基官能團(ODS)的非極性填料。也有無定型和球型之分。常用的其他的反相填料還有鍵合C8、C4、C2、苯基等,其顆粒粒徑在3—10 μm之間。
 
正相色譜柱的使用方法
1.新柱子可直接用流動相。推薦先用正己烷-乙腈(99:1)以0.5ml/min的流速沖10倍柱體積,再根據(jù)流動相選用極性相近的氯或二氯甲烷以相同的流速沖10倍柱體積,zui后換成流動相;


2.正相使用時,不宜分析含醛基、羰基的化合物,不可用于還原糖的分析;流動相要*脫氣,并不得含有羰基化合物和過氧化物(質(zhì)量不好的億醚、四氫呋喃含有少量);


3.任何時候更換流動相時都要確保新流動相與柱子原保存液可互溶。 

反相色譜柱的使用方法
1.先用正己烷-乙腈(99:1)以0.5ml/min的流速沖10倍柱體積,再依次以相同的流速相同的用量用氯、異丙醇、甲醇、甲醇-水(50:50)沖柱子;
2.以0.5ml/min的流速用30倍柱體積的pH11.0的氫氧化鈉(LUNA)水溶液沖柱子(注意pH值切不可超過11.0),立即用水( 0.5ml/min的流速,30倍柱體積)沖洗,再換成流動相;
3.配制流動相時,應各組分分別量取,比例較小的組分要精密量取,需調(diào)pH值時要精密到0.1;
4.反相條件下使用時,要特別注意控制pH值范圍,pH值越低越有發(fā)生水解的危險,流動相中水的比例越高當然也越有發(fā)生水解的危險。的pH范圍在pH 3.0-7.0;
5.如果要使用的流動相中還含有緩沖鹽類,建議在用分析流動相之前,先用不含緩沖鹽的同比例流動相過渡,這樣可避免緩沖鹽在分析柱內(nèi)的析出。

TEL:13774311437

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